酒精沉淀蛋白质

乙醇沉淀蛋白质是蛋白发生变性析出,操作也就是把乙醇滴加到蛋白质溶液中去即可

这就是五变参数:蛋白质含量,离子强度,溶液pH值,乙醇浓度,溶液温度.1.蛋白质含量,愈高,共沉多;反之,分离愈彻底.当然有度.溶液太稀了,成本高.2.离子强度:这与介电强度有关.3.溶液pH值:调到目标蛋白等电点周围.4.乙

低温沉淀乙醇是可逆的

乙醇引起的变性与沉淀 取3支试管,编号.依顺序加入试剂: 试管一: 5%卵清蛋白溶液、95%乙醇、pH4.7缓冲溶液各1mL 试管二: 5%卵清蛋白溶液、95%乙醇、0.1mol/L的NaOH溶液各1mL 试管三: 5%卵清蛋白溶液、95%乙醇、0.1mol/L

一般来说乙醇浓度多少,与目标蛋白的分子量有关:比如8%,可沉淀纤维蛋白原,20%可沉淀球蛋白,40%可沉淀白蛋白等等,当然,乙醇浓度与溶液pH值配合使用.加入乙醇不能过快,防止局部过浓.要边加边摇动. 否则,共沉多!或者局部变性.

研究蛋白质变性

＂蛋白质的性质不稳定,遇酸、碱、热或某些试剂作用都可沉淀,例如将含蛋白质的水溶液加热至沸或在含蛋白质的溶液中加入乙醇等溶剂,或加入中性盐类(如氯化钠)或醋酸铅等试剂,都可使蛋白质沉淀＂ 加酸调节PH的目的在于纯化过程中减少蛋白质沉淀

浓度是100%,因为需要用无水乙醇.有水相的话,会溶解部分蛋白质或糖.如果想沉淀充分的话,就放置4度冰箱两小时.

酒精引起蛋白质沉淀的原因一方面是由于其加入水中使溶剂介电常数降低,增加了相反电荷的吸引力,另一方面是因酒精是强亲水试剂,争夺蛋白质分子表面的水化水,破坏蛋白质胶体分子表面的水化层而使分子聚集沉淀.一定浓度的酒精才可以使蛋白质变性(比如医院用的75%的乙醇消毒液),并不是所有浓度的酒精都可以使蛋白质变性,有些浓度的酒精只会使蛋白质沉淀析出而已.

变性作用是蛋白质受物理或化学因素的影响,改变其分子内部结构和性质的作用.一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏,都是变性的结果.能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、乙醇、丙酮等;